PCR, reaksiyona zincîra polîmerazê ye, ku behsa lêzêdekirina dNTP, Mg2+, faktorên dirêjbûnê û faktorên zêdekirina zêdekirinê li pergalê dike ku di bin katalîzasyona ADN-yê polîmerazê de ye, bi karanîna ADN-ya dêûbav wekî şablon û primerên taybetî wekî xala destpêkê ya dirêjkirinê bikar tîne. Di nav gavên denaturasyon, helandin, dirêjkirin, hwd. de, pêvajoya dubarekirina in vitro ya ADNya keçika ku temamkerê ADN-ya şablonê stûna dêûbav e, dikare zû û bi taybetî her DNA-ya armancê di vitro de zêde bike.
1. Destpêka Germ PCR
Dema destpêkirina zêdekirinê di PCR-ya kevneşopî de ne ew e ku makîneya PCR têxe nav makîneya PCR-ê, û dûv re bername dest bi zêdebûnê dike.Dema ku veavakirina pergalê qediya, zêdekirin dest pê dike, ku dibe sedema zêdekirina ne-taybetî, û PCR-destpêka germ dikare vê pirsgirêkê çareser bike.
PCR destpêka germ çi ye?Piştî ku pergala reaksiyonê tê amadekirin, guherbarê enzîmê di germahiya bilind de (bi gelemperî ji 90 ° C bilindtir) di qonaxa germkirina destpêkê ya reaksiyonê an qonaxa "destpêka germ" de tê berdan, da ku DNA polîmeraz were çalak kirin.Dem û germahiya tam ya aktîfkirinê bi xwezaya ADN polymerase û guhêrbar-destpêka germ ve girêdayî ye.Ev rêbaz bi giranî guhezkerên wekî antîbodî, lîgandên têkildar, an guhêrbarên kîmyewî bikar tîne da ku çalakiya DNA-polymerase asteng bike.Ji ber ku çalakiya DNA polymerase di germahiya odeyê de tê asteng kirin, teknolojiya destpêka germ ji bo amadekirina pergalên reaksiyonê yên pirjimar ên PCR-ê li germahiya odeyê bêyî qurbankirina taybetmendiya reaksiyonên PCR rehetiyek mezin peyda dike.
2. RT-PCR
RT-PCR (Reverse transcription PCR) teknîkek ceribandinê ye ji bo veguheztina berevajî ji mRNA li cDNA û karanîna wê wekî şablonek ji bo zêdekirinê.Pêvajoya ceribandinê ev e ku pêşî li tevnvîs an şaneyan RNA-ya tevahî derxînin, Oligo (dT) wekî destpêkek bikar bînin, transkrîptaza berevajî bikar bînin da ku cDNA sentez bikin, û dûv re cDNA wekî şablonek ji bo zêdekirina PCR bikar bînin da ku genê armanc bistînin an îfadeya genê bibînin.
3. PCR mîqdar a fluorescent
PCR mîqdar a fluorescent (PCR-ya mîqdar a rast-dem,RT-qPCR) behsa rêbaza lêzêdekirina komên fluorescentê li pergala reaksiyona PCR dike, bi karanîna berhevkirina sînyalên fluorescentê ji bo şopandina tevahiya pêvajoya PCR-ê di wextê rast de, û di dawiyê de bi karanîna kêşeya standard ji bo analîzkirina jimarî ya şablonê.Rêbazên qPCR bi gelemperî têne bikar anîn SYBR Green I û TaqMan.
4. Nested PCR
Nested PCR ji bo du gerên zêdekirina PCR-ê, karanîna du komên PCR-ya primeran vedibêje, û hilbera zêdekirinê ya dora duyemîn perçeya genê ya armanc e.
Ger nelihevhatina cotê pêşîn (primerên derve) bibe sedem ku hilberek netaybet were zêdekirin, îhtîmala ku heman herêma netaybet ji hêla cotê duyemîn primerê ve were nas kirin û mezinkirin berdewam bike pir hindik e, ji ber vê yekê zêdekirina bi cotê duyemîn primera, taybetmendiya PCR çêtir bûye.Yek feydeyek ji pêkanîna du gerên PCR ev e ku ew arîkariya zêdekirina hilberek têr ji DNA-ya destpêkê ya sînorkirî dike.
5. Touchdown PCR
Touchdown PCR rêbazek e ku taybetmendiya reaksiyona PCR-ê bi sererastkirina parametreyên çerxa PCR-ê çêtir dike.
Di touchdown PCR de, germahiya pijandinê ji bo çend çerxên pêşîn çend derece li ser germahiya herî zêde ya pijandinê (Tm) ya prîmeran tê danîn.Germahiya pijandinê ya bilind dikare bi bandor zêdekirina ne-taybetî kêm bike, lê di heman demê de, germahiya pijandinê ya bilind dê veqetandina primer û rêzikên armancê xirabtir bike, û di encamê de hilberîna PCR kêm bibe.Ji ber vê yekê, di çend çerxên pêşîn de, bi gelemperî germahiya annealkirinê ji bo her çerxê 1 ° C kêm dibe da ku naveroka genê armancê di pergalê de zêde bike.Dema ku germahiya pijandinê digihîje germahiya optimum, germahiya lêdanê ji bo çerxên mayî tê domandin.
6. PCR rasterast
PCR-ya rasterast tê wateya zêdekirina DNA-ya armancê rasterast ji nimûneyê bêyî ku hewcedariya veqetandin û paqijkirina asîdên nukleîk hebe.
Du celeb PCR-ya rasterast hene:
rêbaza rasterast: Mîqdarek piçûk ji nimûneyê bistînin û ji bo nasnameya PCR rasterast li PCR Master Mix zêde bikin;
rêbaza şikandinê: piştî nimûneya nimûneyê, wê têxin lîzatê, lîz bikin da ku genom azad bibe, mîqdarek piçûk ji supernatantê lîzkirî bistînin û têxin nav PCR Master Mix, nasîna PCR bikin.Ev nêzîkatiya xebata ceribandinê hêsan dike, dema destan kêm dike, û di dema gavên paqijkirinê de ji windabûna DNA dûr dikeve.
7. SOE PCR
PCR (SOE PCR) bi dirêjkirina hevûdu PCR (SOE PCR) prîmerên bi dawîyên temamker bikar tîne da ku hilberên PCR zincîreyên li hevûdu ava bikin, ji ber vê yekê di reaksiyona zêdekirina paşîn de, bi dirêjkirina zincîreyên li hevûdu, çavkaniyên cihêreng ên teknîka A ku tê de perçeyên zêdekirî li hev têne hev kirin. û bi hev ve zeliqandin.Vê teknolojiyê niha du rêgezên serîlêdanê yên sereke hene: avakirina genên fusion;mutasyona cîhê gene.
8. IPCR
Berevajî PCR (IPCR) primerên temamker ên berevajî bikar tîne da ku perçeyên ADN-ê ji bilî du prîmeran zêde bike, û rêzikên nenas li her du aliyên perçeyek DNA ya naskirî zêde dike.
IPCR bi eslê xwe ji bo destnîşankirina rêza herêmên nenas ên cîran hate sêwirandin, û bi piranî ji bo lêkolîna rêzikên promotorê genê tê bikar anîn;vesazkirinên kromozomî yên onkojenîk, wek hevgirtina genê, veguheztin û veguheztinê;û entegrasyona gena vîrusê jî, niha bi gelemperî têne bikar anîn.
9. dPCR
Dîjîtal PCR (dPCR) teknîkek ji bo pîvandina bêkêmasî ya molekulên asîda nukleîk e.
Niha sê rêbaz hene ji bo pîvandina molekulên asîda nukleîk.Fotometrî li ser vegirtina molekulên asîda nukleîk tê damezrandin;PCR-ya mîqdar a fluorescentê ya rast (Real Time PCR) li ser bingeha nirxa Ct-yê ye, û nirxa Ct ji jimareya çerxê ya ku li gorî nirxa floransê ya ku dikare were tespît kirin vedibêje;PCR-ya dîjîtal teknolojiya herî dawî ya Hêjdar e ku li ser bingeha rêbaza PCR-ya yek-molekulê ye ji bo jimartina mîqdarkirina asîda nukleîk rêbazek mîqdar a mutleq e.
Dema şandinê: Jun-13-2023